Superoxide overproduction and kidney fibrosis: a new animal model / Produção aumentada de superóxido e fibrose renal: novo modelo animal

Objective To establish whether the mutation in the Immp2L gene induces renal fibrosis and whether aging exacerbates renal morphology in mice. Methods Female mutant mice with mutation in the inner mitochondrial membrane peptidase 2-like protein at 3 and 18 months of age were used. Renal fibrosis was analyzed using classic fibrosis score, Masson’s trichrome staining, and analysis of profibrotic markers using real time polymerase chain reaction (superoxide dismutase 1, metalloproteinase-9, erythropoietin, transforming growth factor beta), and immunostaining (fibroblasts and Type IV collagen). Oxidative stress markers were determined by immunohistochemistry. The number of renal apoptotic cells was determined. Renal function was estimated by serum creatinine. Results Young mutant mice had significantly more glomerulosclerosis than age-matched mice (p=0.034). Mutant mice had more tubular casts (p=0.025), collagen deposition (p=0.019), and collagen type IV expression (p<0.001). Superoxide dismutase 1 expression was significantly higher in young mutants (p=0.038). Old mutants exhibited significantly higher expression of the fibroblast marker and macrophage marker (p=0.007 and p=0.012, respectively). The real time polymerase chain reaction of metalloproteinase-9 and erythropoietin were enhanced 2.5- and 6-fold, respectively, in old mutants. Serum creatinine was significantly higher in old mutants (p<0.001). Conclusion This mutation altered renal architecture by increasing the deposition of extracellular matrix, oxidative stress, and inflammation, suggesting a protective role of Immp2L against renal fibrosis. .

Objetivo Estabelecer se a mutação no gene Immp2L induz à fibrose renal e se o envelhecimento exacerba a morfologia renal em camundongos. Métodos Foram usadas fêmeas de camundongos mutantes para proteína semelhante à peptidase 2 da camada interna da mitocôndria, com 3 e 18 meses de idade. Para analisar a fibrose renal, foram usados o escore clássico de fibrose, a coloração com tricrômio de Masson, e a análise de marcadores profibróticos, por meio da reação em cadeia de polimerase em tempo real (superóxido dismutase 1, metalonoproteinase-9, eritropoietina e fator transformador de crescimento beta), e a imunocoloração (fibroblastos e colágeno IV). Marcadores de estresse oxidativo foram determinados por imuno-histoquímica. O número de células apoptóticas renais foi analisado. A função renal foi estimada por creatinina sérica. Resultados Camundongos mutantes jovens apresentaram glomeruloesclerose em quantidade significativamente maior que animais da mesma idade (p=0,034). Os mutantes mostraram maior formação de cilindros tubulares (p=0,025), deposição de colágeno (p=0,019) e maior expressão de colágeno do tipo IV (p<0,001). A expressão de superóxido dismutase 1 foi maior em mutantes jovens (p=0,038). Mutantes idosas exibiram maior expressão dos marcadores de fibroblastos e macrófagos (p=0,007 e p=0,012, respectivamente). As reações da cadeia de polimerase em tempo real da metalanoproteinase-9 e da eritropoietina estavam aumentadas em 2,5 e 6 vezes, respectivamente, em mutantes idosas. A creatinina sérica foi significantemente maior em animais idosos mutantes (p<0,001). Conclusão Essa mutação alterou a arquitetura renal pelo aumento da deposição de matriz extracelular, estresse oxidativo e inflamação, sugerindo papel de proteção de Immp2L contra a fibrose renal. .

Associação entre proteínas do plasma seminal, motilidade e viabilidade espermática em coelhos submetidos a doping genético / Association among seminal plasma proteins, sperm motility and sperm viability in rabbits submitted to gene doping

Neste trabalho foi estudada a correlação entre o perfil proteico do plasma seminal e a motilidade e viabilidade espermática em coelhos submetidos ao tratamento com vetores de expressão contendo o gene da eritropoetina (EPO) e com EPO recombinante humana. Foram identificadas, em coelhos submetidos ao tratamento com vetor de DNA contendo o gene da EPO, duas bandas proteicas associadas a alterações na motilidade espermática - 48kDa à baixa motilidade (P<0,05) e 18kDa à alta motilidade (P<0,05) - e esse fator foi associado a maior viabilidade espermática (P<0,05). Em coelhos submetidos ao tratamento com EPO recombinante, um fator proteico, 63kDa, associou-se à alta motilidade espermática (P<0,05), enquanto dois, 26 e 40kDa, foram associados à alta viabilidade espermática (P<0,05). Esses resultados sugerem que o doping genético pode ocasionar mudanças no perfil proteico do plasma seminal, provocando alterações na motilidade e viabilidade espermática.

In this study the correlation between seminal plasma protein profile and the sperm motility and sperm viability in rabbits submitted to treatment with an expression vector containing EPO gene and with human recombinant EPO was evaluated. In rabbits submitted to treatment with EPO expression vector, two protein bands were associated to sperm motility - 48kDa associated to low motility (P<0.05) and 18kDa to high motility (P<0.05) - and this protein band was also associated to high sperm viability (P<0.05). In rabbits submitted to treatment with human recombinant EPO, a protein factor, 63kDa, was associated to high sperm motility (P<0.05) while two protein factors, 26 and 40kDa, were associated to high sperm viability (P<0.05). These results suggest that gene doping leads to changes in rabbit seminal plasma protein, altering sperm motility and sperm viability.

Eritropoetina não diminui mortalidade em pacientes com câncer / Erythropoietin does not reduce mortality in patients with cancer

Pacientes com câncer tratados com estimuladores de eritropoiese apresentam risco de morte similiar aos que utilizaram a Eitropoetina.

Prevención de anemia en prematuros: transfusiones con eritropoyetina: Hospital de San José, 2006-2008 / Erythropoietin to prevent the anemia of prematurity: San José Hospital, 2006-2008

La terapia con eritropoyetina todavía no ha sido bien definida y su uso rutinario varía de acuerdo con el criterio de cada unidad neonatal. En el Hospital de San José la prevención de la anemia del prematuro ha ido cambiando con el tiempo. Objetivo: determinar la frecuencia de transfusiones según el tratamiento administrado a los recién nacidos pretérmino en la unidad de cuidado intermedio del Hospital de San José en el período 2006-2008. Metodología: se realizó un estudio observacional, descriptivo y longitudinal. Se revisaron 115 historias clínicas, de las cuales se obtuvieron 34 pacientes que cumplieron con los criterios de inclusión. Resultados: de los pacientes a quienes se les administró eritropoyetina 4,76% necesitaron transfusión y de los que no la recibieron 46,1% requirieron por lo menos una. Entre aquellos con edad gestacional corregida menor o igual a 30 semanas que recibieron eritropoyetina 50% no requirieron TR, y sin el uso de ésta 50% fueron transfundidos. Con edad gestacional mayor a 30 semanas y empleo de eritropoyetina, el 92,3% no requirieron TR y sin su uso el 71,3% sí. Conclusión: se puede pensar que el uso de eritropoyetina disminuye la necesidad de TR de glóbulos rojos.

Erythropoietin therapy has not yet been well defined and its use varies according to individual neonatal care unit protocols.Prevention of the anemia of prematurity at the San José Hospital has changed over time. Objective: to determine thefrequency of transfusion therapy related to the treatment administered to preterm infants at the Intermediate Care Unit at the San José Hospital between 2006 and 2008. Methodology: a longitudinal descriptive observational study was conducted in 34 patients satisfying the inclusion criteria, selected from 115 clinical records reviewed. Results: of patients who received erythropoietin 4.76% were transfused and of those who did not 46.1% required at least one transfusion. In those with a corrected gestational age = to 30 weeks who received erythropoietin, 50% did not require a transfusion, and of those who did not 50% were transfused. Those newborns with gestational age greater than 30 weeks and had received erythropoietin, 92.3% did not need to be transfused and of those who did not, 71.3% were transfused. Conclusion: it can be concluded that erythropoietin therapy reduces the need of red blood cells transfusion.

Evidência adicional de que uso de água ultrapura diminui inflamação em hemodiálise / Further evidence that ultrapure water decreases inflammation in hemodialysis

Introdução: Uso de membranas não bio- compatíveis e exposição a água imprópria para hemodiálise (HD) podem aumentar os níveis de Proteína- Creativa (PCR). Esse estudo, acompanhando um grupo de indivíduos em HD, avaliou padrões de inflamação antes e após a introdução de água ultrapura (AUP). Métodos: PCR foi determinada nos mesmos 31 pacientes antes e depois da introdução da AUP para HD. Episódios de calafrios (não associados com infecção detectada) e transfusões de sangue foram mensurados nos três meses precedendo as determinações laboratoriais. Dialisadores de polissulfona foram utilizados. Análise estatística: teste t para amostras pareadas, Wilcoxon- ranked signed test, qui- quadrado e odds- ratio. Resultados:A comparação entre os períodos de 3 meses antes e 3 meses após a implantação da AUP permitiu observar diferenças nos parâmetros: incidência decalafrios (42 episódios versus dois episódios em 1178 sessões, p< 0.0001); número de transfusões (0,193 versus 0,096 unidades/paciente/mês, p<0,0001); Hemoglobina (Hgb) média, (aumentou de 9.6±1.8 para 10.4±1.6 g/dL, p< 0.007); e PCR média (diminuiu de 1.05±0.74 para 0.43±0.23 mg/dL, p< 0.001). Conclusões: Significativa redução nos níveis de PCR, com marcada diminuição dos episódios de calafrios ocorreu, apontando para diminuição dos níveisinflamatórios após uso de AUP. O aumento de Hgb refletiu-se na diminuição da necessidade de transfusões, sugerindo que a AUP diminuiu a inflamaçãodos pacientes em HD.

Background: Use of non-biocompatible membranes and exposure to inappropriately treated hemodialysis (HD) water may increase C- reactive protein (CRP). This study, following a single group of HD individuals, evaluated signs of inflammation before and after using ultrapure water (UPW) for HD.Methods: CRP levels were measured in the same 31 patients before and after UPW implementation in HD. Episodes of chills (not associated with detectableinfections) and blood transfusions, were compared in the three months periods preceding the laboratory determinations. Polysulfone dialyzers were used. Statistical analysis was accomplished using paired t test, Wilcoxon signed-rank test, chi-square test and odds-ratio. Results: The comparison between the3 months period preceding and following UPW implementation disclosed differences in the following parameters: incidence of chills (42 versus 2 episodesin 1178 HD sessions, p<0.001); number of blood transfusions ( 0.193 versus 0.096 units/patient/ month, p<0.0001). Mean Hemoglobin (increased from9.6±1.8 to 10.4±1.6 g/dL, p=0.01); and mean CRP (dropped from 1.05±0.74 to 0.48±0.23 mg/dL, p<0.001). Conclusions: A significant reduction in CRP levels occurred with marked decrease in the episodes of chills pointing to a diminished inflammatory process with the use of UPW. The increase in Hgblevels was reflected in the decrease of blood transfusion requirements, suggesting that the use of UPW reduces the inflammatory status of hemodialysispatients.

Perfil do paciente que inicia hemodiálise de manutenção em hospital público em Salvador, Bahia / Profile of patients initiating chronic hemodialysis at a public hospital in Brazil

Introdução: Este trabalho descreve o perfil do paciente que inicia hemodiálise (HD) de manutenção durante internamento em hospital do Sistema Únicode Saúde. Métodos: Todos os pacientes maiores de 18 anos que receberam diagnóstico de doença renal em estágio final (DREF) e iniciaram HD duranteinternamento no Hospital Roberto Santos entre 08/2004 e 03/2005, foram submetidos a uma entrevista estruturada na admissão e seguidos até a altahospitalar. Resultados: Avaliamos 122 pacientes. A média de idade foi 55±16 anos; 61% eram mulheres. A maioria (91%) relatou ter realizado pelo menosuma consulta médica no último ano, assim como exames de sangue/urina nos últimos cinco anos (aproximadamente 80%); contudo, quando detectamosDREF, 57% não sabiam que tinham doença renal e 71% não tinham sido examinados por nefrologista. Metade utilizava pronto socorro como local primáriode atenção médica. A média de hemoglobina na admissão foi 7,7±2,3 g/dL; nenhum paciente recebeu previamente eritropoietina e 50% necessitaram detransfusão sangüínea durante hospitalização. Antes da HD, as médias de uréia, creatinina, cálcio e fósforo séricos foram, respectivamente, 254±105, 12±7,7,8±1,3 e 7,3±2,5 mg/dL; a média da albumina sérica foi 2,7±0,8 g/dL. Antes do internamento, calcitriol foi administrado para 1 paciente e quelantes defósforo para 2. Apenas 1 paciente iniciou HD por fístula e o restante por cateter temporário. O tempo médio de internamento foi 34±26 dias e a mortalidadehospitalar 19,7%. Discussão e Conclusões: Deficiências na atenção básica à saúde contribuem para o diagnóstico tardio da doença renal, gerando altamorbi-mortalidade durante hospitalização para iniciar HD.

Introduction: Herein we describe the profile of patients initiating maintenance hemodialysis (HD) during admission to a public hospital in Brazil. Methods:All patients older than 18 years who initiated HD for end-stage renal disease (ESRD) at Hospital Roberto Santos between 08/2004 and 03/2005 wereinterviewed at admission and followed till hospital discharge. Results: We evaluated 122 patients. Mean age was 55±16 years; 61% were female. At leastone doctor visit was reported by 91% and approximately 80% reported blood/urine studies within the last 5 years; however, at the time of ESRD diagnosis,57% did not know they had renal disease and 71% had not been seen by a nephrologist. Hospital emergency rooms were used as the main source ofmedical care by 49%. Mean hemoglobin at admission was 7.7±2.3 g/dL; no patient had been previously treated with erythropoietin and 50% underwentblood transfusions during admission. Metabolic parameters before the first dialysis were (mg/dL): urea 254±105, creatinine 12±7, calcium 7.8±1.3 andphosphorus 7.3±2.5; mean albumin level was 2.7±0.8 g/dL. Before admission, one patient had used calcitriol and 2 had used phosphate binders. One patientinitiated HD through a fistula and the remaining through temporary catheters. Mean length of stay was 34±26 days and hospital mortality was 19.7%.Discussion and Conclusions: Inadequacies in primary care contribute to late diagnosis of renal disease, which is associated with high morbidity andmortality during admission to initiate dialysis.

Policitemia neonatal e hiperviscosidad / Neonatal polycythemia and hyperviscosity

Se define policitemia neonatal al aumento anormal de glóbulos rojos traducido por un hematocrito venosocentral mayor o igual a 65% durante los primeros días de vida. La elevación del hematocrito se asocia en algunos casos con hiperviscosidad sanguínea que produce alteraciones en el flujo sanguíneo de varios órganos.

Expected value of serum soluble transferrin receptor, erythropoietin and ferritin and their correlation among healthy non-anemic Thai children.

Transferrin receptor (TfR) is a glycoprotein which mediates the entry of ferric transferrin from the extracellular compartment into the cells. The measurement of sTfR has become a widely used tool in assessing erythropoiesis but its use has mainly been restricted to research laboratory settings. In Thailand, there are only a few reports concerning the sTfR. The authors studied the expected value of sTFR as well as other basic parameters for monitoring of erythropoiesis as erythropoietin (EPO) and ferritin among a sample of non-anemic healthy Thai children. In addition, correlation was done between each pair of studied parameters. Expected range for sTfR level for the healthy controls in this study was 1.761 to 2.034 mg/L. Expected range for serum EPO level for the healthy controls in this study was 19.445 to 34.176 mU/ml. Expected range for serum ferritin level for the healthy control from this study was 67.895 to 96.692 ng/ml. Of interest, poor correlation among the three studied parameters, sTfR, serum EPO and serum ferritin was observed in this study.

Erythropoietin assay in mice made polycythemic by transfusion of heterologous red cells

A simple in vivo bioassay suitable testing of quality control of recombinant human erythropoietin (rHu-EPO) analogues was developed. Mice made polycythemic by intraperitoneal injection of 1.2 ml of a 80 per cent suspension of heterologous (rat) red cells were used as assay animals and splenic 59 Fe uptke as expression of the response to rHu-EPO. The assay took three days and the following schedule is propose: 1)intraperitoneal injection of 1.2 ml of washed packed red cells obtained from donor rats, 2) subcutaneous injection of test material 4-5 h after transfusion, 3) intravenous administration of 59 Fe tracer 48 h later, and 4) determination of splenic isotope uptake 6 h after injection. This method for the in vivo biossay of rHu-EPO analogues is an economical and reliable alternative to the existing bioassays of the hormone

Tratamiento con eritropoyetina humana recombinante en período neonatal: indicaciones y controversias / Treatment with recombinant human erythropoietin in the neonate: progress and controversies

La eritropoyetina recombinante (rHuEPO) se utiliza en dos patologías del neonato que se caracterizan por tener niveles inadecuadamente bajos de eritropoyetina circulante: la anemia del prematuro (AP) de muy bajo peso de nacimiento y la anemia hiporregenerativa tardía de la enfermedad hemolítica por incompatibilidad Rh (EHIRh). La experiencia recogida luego de 5 años de utilización en la AP ha demostrado que : a) parece no traer complicaciones; b) para ser efectiva, debe usarse a dosis no inferiores a 500 Ul/kg/semana; c) induce una marcada estimulación de la eritropoyesis, evidenciable por la importante respuesta reticulocitaria observada; d) disminuye significativamente los requerimientos transfuncionales cuando se administra a partir de la 2a. semana de vida; e) no está aún establecida la utilidad de su empleo desde las primeras horas de vida; f) el tratamiento debe durar de 6 a 8 semanas; g) el principal factor limitante de su eficacia terapéutica es la depleción de hierro, por lo que el mismo debe administrarse a dosis de 6 mg/kg/día o superiores mientras dure el tratamiento con rHuEPO. Por lo tanto, su utilización rutinaria parece estar justificada para disminuir la probabilidad de ocurrencia de complicaciones transfuncionales, aunque simultáneamente se deberán realizar los máximos esfuerzos para establecer criterios transfusionales estrictos y disminuir los volúmenes de sangre extraídos para análisis. En niños con EHIRh que han recibido transfusiones intrauterinas se produce una marcada inhibición de la eritropoyesis que demora 2 a 4 meses en recuperarse espontáneamente. El tratamiento con rHuEPO, en los casos comunicados, logró evitar la indicación de transfusiones adicionales. Se encuentran en marcha algunos estudios prospectivos

Bioquimica de la eritropoyetina / Biochemistry of erithropoyetin

Se revisan los factores involucrados en la regulacion normal de la eritropoyesis, los principales acontecimientos historicos en el conocimiento a cerce de la eritropoyetina y su papel en la estimulacion y regulacion de la eritropoyesis, la estructura molecula, mecanismos de accion, tecnicas de laboratorio para su determinacion, valores normales en sangre y orina, metabolismo, produccion renal y extrarenal y sus implicaciones clinicas tanto en las anemias como en las policitemias.

Hiperglicemia e hemoglobina fetal / Hyperglycemia and fetal hemoglobin

O presente trabalho se refere a importancia da hiperglicemia na síntese de hemoglobina F. Foram estudados 1027 indivíduos normais e 226 com hiperglicemia (diabéticos descompensados). A hemoglobina F foi dosada pela técnica da Desnaturaçäo alcalina de Betke e cols (1969). Os nossos resultados mostraram que: 1) nos indivíduos com hiperglicemia os níveis de hemoglobina F estäo diminuidos quando comparados com os níveis apresentados pelos indivíduos normais; 2) os níveis diminuídos de hemoglobina F näo estiveram relacionados com determinadas condiçöes que estäo presentes nos diabéticos - faixa etária, tipo de diabete I e II, período da diabete no indivíduo (meses, anos) e evoluçäo clínica da diabete (presença ou ausência de coma). Discute-se sobre a açäo da eritropoietina e da hiperglicemia na eritropoiese: a) acredita-se que a eritropoietina e a hiperglicemia atuam de modo diferente na celula precursora eritróide (BFU-E); b) a eritropoietina estimulando as divisöes celulares tendo como consequencia maior ou menor número de hemácias circulantes; c) a hiperglicemia interferindo na diminuiçäo da produçäo de hemoglobina F. Conclue-se admitindo-se que, o padräo de formaçäo de hemoglobina F no tecido adulto hematopoiético pode ser reversivel na dependência do ambiente metabólico celular, e que, a elucidaçäo destes mecanismos pode ser de particular importância para ajudar no diagnóstico e ou tratamento de variadas disordens hereditárias e adquiridas que envolvem alteraçöes da hemoglobina F